| 作者： | 熊美丽 |
| 专业： | 妇产科学 |
| 导师： | 宗利丽 |
| 授予学位： | 硕士 |
| 授予学位单位： | 南方医科大学 |
| 关键词： | 子宫内膜异位症;HOXA10;PTEN;基因启动子;5’CpG岛甲基化;发病机制 |
| 摘要： | 子宫内膜异位症（Endometriosis，简称内异症或Ems）是妇科常见的一种良性疾病，它所引起的慢性盆腔疼痛、痛经和不育严重影响了妇女健康和生活质量。由于病变广泛、形态多样，有转移、浸润和复发等恶性生物学行为，并且确实能发生恶变，多恶变为卵巢癌，所以内异症被形象地称为“良性癌”和妇女盆腔“沙尘暴”。目前其发病机制尚未清楚，越来越多的研究认为类似恶性肿瘤的生物学行为可能是其重要的发病机制之一，而恶性病变的发生、发展是以抑癌基因和癌基因遗传变异的积累为标志的，故内异症的起源与发展亦可能与此遗传变异相关，尤其是抑癌基因的异常甲基化，大量的研究已经证实：抑癌基因非甲基化的CpG岛异常甲基化与人类恶性肿瘤的发生、转移密切相关。在大多数正常情况下，抑癌基因的启动子区5’ CpG岛是处于非甲基化状态，CpG岛高甲基化可以使抑癌基因失活，转录抑制，导致其表达下降，最终促使肿瘤的发生。 有研究报道在多种肿瘤中，HOXA10基因的表达下降，HOXA10基因可抑制肿瘤细胞增殖，降低侵袭能力，抑制肿瘤细胞的转移。提示HOXA10基因可能是一种新的候选抑癌基因，PTEN基因作为一种普遍公认的抑癌基因，已经被证实在多种肿瘤中起重要作用，包括脑、卵巢、子宫内膜、前列腺、乳腺、甲状腺、肝、肺和头颈部癌以及淋巴瘤，特别是在卵巢子宫内膜样癌、子宫内膜癌和胶质瘤中起重要作用。与其他抑癌基因引起肿瘤的发病机制类似，HOXA10与PTEN基因启动子区5’CpG岛高甲基化可能是引起肿瘤发生与发展的重要机制之一。并且有研究认为，HOXA10与PTEN基因启动子区域5’CpG岛甲基化异常与卵巢癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。内异症作为一种良性性质恶性行为的疾病，且与卵巢癌关系密切，它的PTEN与HOXA10基因是否也存在高甲基化呢？甲基化是否在其发病中也起重要作用呢？目前尚不清楚，国内外这方面研究甚少，特别是PTEN基因甲基化在内异症的作用，国内外尚未见报道。 目的: 本研究通过检测内异症患者在位、异位内膜组织及非内异症妇女子宫内膜组织中HOXA10、PTEN基因启动子区5’CpG岛甲基化状况，探讨它们在内异症发生发展中的作用，为进一步探索内异症的发病机制提供新的研究方向，也为今后深入的研究提供有价值的科研资料。 方法: 1.标本来源：2007年9月-2008年7月期间南方医科大学珠江医院妇产科经腹腔镜证实为内异症患者30例为研究组（其中Ⅰ～Ⅱ期10例，Ⅲ～Ⅳ期20例），获取到患者异位内膜共30份、在位内膜20份；同期非内异症的正常妇女25例为正常对照组，取子宫内膜25份。 2.实验方法： （1）用蛋白酶K消化法提取新鲜组织标本基因组DNA； （2）采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specificPCR，MSP）检测所有内膜组织中HOXA10与PTEN基因启动子区5’CpG岛甲基化情况。 采用文献[28，33]报道的HOXA10与PTEN基因启动子区域5’CpG岛的引物，设立实验空白对照。 3.统计分析：内异症患者在位、异位内膜组织及正常对照子宫内膜组织三组之间HOXA10与PTEN基因的甲基化比较采用多个样本率的X2检验；两两比较及Ⅲ-Ⅳ期与Ⅰ-Ⅱ期内异症患者HOXA10与PTEN基因的甲基化比较用Fisher's确切概率法（样本总量小于40或理论频数小于5），多个样本率间的多重比较的检验水准经校正后，a为0.0167（如以0.05为检测水准，将会加大犯Ⅰ型错误的概率），其它比较的检验水准a为0.05，（统计软件采用SPSS13.0）。 结果: 1.内异症患者在位、异位内膜组织与正常对照组子宫内膜组织中HOXA10基因甲基化比较：内异症患者30份异位内膜组织中检测到12份HOXA10基因甲基化；患者20份在位内膜组织中检测到7份HOXA10基因甲基化；正常对照组子宫内膜组织未检测到HOXA10基因甲基化，三组之间HOXA10基因的甲基化比较用多个样本率的卡方检验，结果显示有统计学意义（P<0.05）；两两比较显示：患者在位内膜与正常对照妇女子宫内膜比较无统计学差异；患者的在位内膜与异位内膜比较无统计学差异；但患者异位内膜与正常对照妇女子宫内膜比较有统计学差异； 2.内异症患者在位、异位内膜组织与正常对照组子宫内膜组织中PTEN基因甲基化比较：内异症患者30份异位内膜组织中检测到7份PTEN基因甲基化；20份在位内膜组织中检测到2份PTEN基因甲基化；正常对照组子宫内膜组织未检测到PTEN基因甲基化，用多个样本率的卡方检验结果显示：三组比较有统计学意义（P<0.05）；两两比较显示：患者在位内膜与正常对照妇女子宫内膜比较无统计学差异；患者的在位内膜与异位内膜比较无统计学差异；但患者异位内膜与正常对照妇女子宫内膜比较有统计学差异； 3.不同期别内异症患者异位内膜组织中HOXA10基因甲基化比较：20例Ⅲ-Ⅳ期内异症患者异位内膜组织中有11例HOXA10基因发生甲基化；10例Ⅰ-Ⅱ期内异症患者异位内膜组织中有1例HOXA10基因发生甲基化。Fisher' s确切概率法分析结果为：Ⅲ-Ⅳ期内异症患者异位内膜组织与Ⅰ-Ⅱ期HOXA10基因启动子区5’ CpG岛的甲基化相比较，差异显著（P<0.05），即Ⅲ-Ⅳ期内异症患者异位内膜组织中HOXA10基因启动子区5’CpG岛的甲基化高于Ⅰ-Ⅱ期； 4.不同期别内异症患者异位内膜组织中PTEN基因启动子区5’CpG岛的甲基化比较：20例Ⅲ-Ⅳ期内异症患者异位内膜组织中有6例PTEN基因发生甲基化；10例Ⅰ-Ⅱ期内异症患者异位内膜组织中有1例PTEN基因发生甲基化，Fisher's确切概率法分析结果为：Ⅲ-Ⅳ期内异症患者异位内膜组织与Ⅰ-Ⅱ期PTEN基因甲基化比较，差异无显著性（P>0.05）。 结论: 1.HOXA10和PTEN基因启动子区5’CpG岛的高甲基化可能参与了内异症的发病； 2.HOXA10基因甲基化程度与内异症临床分期相关，可能在内异症的进展中起作用； 3.内异症在位内膜与异位内膜在甲基化方面可能有相似的特性。 |